量子產(chǎn)率(QY)測(cè)試準(zhǔn)確性的分析
量子產(chǎn)率測(cè)試是一個(gè)精準(zhǔn)性的測(cè)試。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),量子產(chǎn)率就是通過(guò)空白(Reference)和樣品(Sample)的發(fā)射光譜,計(jì)算相應(yīng)的峰面積得到。
量子產(chǎn)率測(cè)試的唯一要求就是準(zhǔn)確,測(cè)試的每一個(gè)步驟都需要量化。測(cè)試過(guò)程中的每一個(gè)環(huán)節(jié),每一個(gè)細(xì)節(jié),可能對(duì)結(jié)果的都會(huì)有重大的影響。
本文從量子產(chǎn)率的公式角度,來(lái)分析影響量子產(chǎn)率準(zhǔn)確性的影響因子。
當(dāng)然,要得到準(zhǔn)確的量子產(chǎn)率測(cè)試,嚴(yán)格按照操作步驟來(lái)測(cè)試,是最基本的要求。如果有對(duì)測(cè)試結(jié)果有疑慮,如果掌握需要詳細(xì)的操作步驟,可以聯(lián)系當(dāng)?shù)氐氖酆蠊こ處熁蛘哳A(yù)約相關(guān)的培訓(xùn)。
一、SA
空白的清潔程度直接反應(yīng)出來(lái)的是SA這個(gè)因子的大小。
SA的大小,是激發(fā)光穿透空白(液體)或者從空白上散射出來(lái)進(jìn)入檢測(cè)器的信號(hào)值。
要保證空白的絕對(duì)潔凈度。
對(duì)于固體來(lái)說(shuō),聚四氟乙烯的空白板、空白薄膜片或者其他可以使用的空白物質(zhì),可以提前浸泡、清洗。
對(duì)于液體來(lái)說(shuō),要使用同一批次的比色皿,購(gòu)買(mǎi)時(shí)可以是一對(duì),也可以使用同一比色皿來(lái)測(cè)試空白和樣品。
對(duì)于量子產(chǎn)率高的樣品(特別是90%以上),如果空白有污染,SA會(huì)變小,導(dǎo)致公式的分母變小,很有可能得到超過(guò)100%的結(jié)果。
量子產(chǎn)率測(cè)得過(guò)高,可能是空白有吸收,導(dǎo)致SA偏小。
二、SB
SB是樣品的散射信號(hào)。SB的大小受樣品環(huán)境的影響。比如粉末池外表不干凈,或者粉末沒(méi)有鋪滿,粉末池底部裸露出來(lái),增加了吸收,減小了SB值。
薄膜樣品,薄膜片的吸收影響需要進(jìn)行討論。液體樣品比色皿的潔凈度也是關(guān)鍵。
如果樣品是混合物,要考慮非測(cè)試物質(zhì)吸收的影響。
對(duì)于SB的值,更多的是考慮散射差(SA-SB)的大小??瞻讓?duì)于樣品一定要有對(duì)照性。包括了材質(zhì)、樣品溶液、聚焦甚至樣品的外形,都需要具有對(duì)比性。
如果SA和SB兩個(gè)峰相近,甚至重合,導(dǎo)致(SA-SB)較小,甚至在儀器的誤差范圍內(nèi),測(cè)試出來(lái)的量子產(chǎn)率值誤差較大。遇到這樣情況,需要考慮增加狹縫,散射和發(fā)射分開(kāi)測(cè)試。
三、EA
EA是熒光背景基線。一般接近于檢測(cè)器的噪聲。但如果積分球或者樣品池有污染,背景基線有明顯的熒光峰值,測(cè)出的QY結(jié)果肯定不能接受。
四、EB
EB是樣品的信號(hào)。
液體樣品吸光度要小于0.1。這個(gè)吸光度是在激發(fā)波長(zhǎng)處的吸光度,并且是溶液中物質(zhì)的吸光度,而不是溶液的整體吸光度。
EB的影響,主要是考慮(EB-EA)的數(shù)值,如果太小,也就是發(fā)光弱,最后結(jié)果的誤差也會(huì)增加。這種情況,需要考慮提高掃描精度,甚至需要使用散射和發(fā)射分開(kāi)做的方法,通過(guò)增大狹縫(散射峰使用衰減片)減少最終值誤差。
五、積分球的清潔度
如果積分球污染,對(duì)SA、SB、EA、EB四個(gè)峰都會(huì)有影響,而且影響沒(méi)有規(guī)律性。積分球污染,可能會(huì)吸收一部分散射光,導(dǎo)致SA和SB減??;可能會(huì)吸收樣品的熒光,導(dǎo)致EA減少;也有可能會(huì)直接產(chǎn)生新的信號(hào),影響EA和EB。積分球污染是絕對(duì)要避免的。
建議為積分球準(zhǔn)備一個(gè)洗耳球,用來(lái)吹掃落入的灰塵。固體槽、石英蓋、比色皿都需要即時(shí)清洗或者浸泡,固/液體支架有必要也可以拆下清洗(FS5的固體支架除外)粉末裝樣時(shí),注意靜電導(dǎo)致的粉末灑落;測(cè)試液體,不宜過(guò)滿,防止溢出??梢詼?zhǔn)備一個(gè)紫外燈,用來(lái)檢查積分球和空白板、固體槽是否有污染。如果積分球不幸污染,建議聯(lián)系愛(ài)丁堡售后團(tuán)隊(duì),我們提供清洗和更換內(nèi)膽兩種服務(wù)。
量子產(chǎn)率值要做到絕對(duì)的準(zhǔn)確,看似簡(jiǎn)單,其實(shí)并不容易;對(duì)于一些樣品來(lái)說(shuō),可能是一個(gè)艱巨的工程。量子產(chǎn)率準(zhǔn)確性的影響因素也不僅僅是上面描述的。
我們建議測(cè)試人員要理解測(cè)試操作每一步的意義,這樣才能夠有效評(píng)判測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。
各位客戶如果遇到特殊的問(wèn)題,歡迎和愛(ài)丁堡的售后團(tuán)隊(duì)討論。